Dalam citometri aliran, sinar yang tersebar oleh sel dapat diukur menggunakan dua detektor optik: Forward Scatter (FSC) yang mendeteksi tersebaran sinar searah dengan lintasan laser, dan Side Scatter (SSC) yang mengukur tersebaran sinar pada sudut 90 derajat terhadap laser.
Intensitas FSC berbanding langsung dengan diameter sel, dan terutama karena difraksi sinar di sekitar sel. Sinar FSC dapat digunakan untuk membedakan sel berdasarkan ukurannya. Sebaliknya, SSC berasal dari sinar yang direfrakt atau direfleks pada interface antara laser dengan struktur intraseluler seperti granula dan inti. SSC memberikan informasi tentang kompleksitas internal (yaitu, granularitas) sel.
FSC berguna dalam identifikasi sel dengan ukuran berbeda, seperti monosit dan granulosit. Granulosit dicirikan oleh volume besar granula sitoplasma. Refleksi sinar pada granula meningkatkan intensitas SSC dan memungkinkan diskriminasi antara granulosit dan monosit.
Pulse width (lebar pulse) dapat digunakan untuk mengisolasi sel tunggal yang melewati citometri, sehingga menghapus semua non-sel tunggal (doublets, clumps atau debris).
Gambar 2. Diskriminasi monosit dan limfosit dalam FlowJo™ berdasarkan parameter tersebaran sinar. Catatan: Contoh ini hanya untuk tujuan ilustrasi, populasi yang diilustrasikan tidak sepenuhnya terdiri atas sel monosit dan limfosit, atau pasien mengalami akut monocytosis.
Gambar 3. Diskriminasi granulosit dan monosit dalam FlowJo berdasarkan parameter tersebaran sinar.
Tabel 4. Mengisolasi sel tunggal dari parameter tersebaran sinar dalam FlowJo™.
FSC dan SSC digunakan secara bersamaan oleh citometri aliran, sehingga dua parameter ini dapat memberikan dasar yang cukup untuk mulai menganalisis populasi sel. Ada metode lainnya untuk kuantifikasi sel, tetapi terdapat banyak informasi yang dapat diperoleh dari data tersebaran sinar.
Rujukan
- Shapiro, Howard. Practical Flow Cytometry. New York: Alan R. Liss, 1985.
- Schematic overview of a typical flow cytometer setup. 2016, SelectScience.
Sumber Daya Tambahan untuk membantu memahami FSC vs SSC
- http://expertcytometry.com/whats-flow-cytometry-light-scatter-how-cell-size-particle-size-affects-it/
- https://www.researchgate.net/post/Why_are_FCS_vs_SSC_dot_plots_in_linear_scale_and_other_parameters_in_logarithmic_scale
- http://docs.abcam.com/pdf/protocols/Introduction_to_flow_cytometry_May_10.pdf
Note: The article is written in Markdown format, which allows for the use of special characters and formatting.