Kita semua pernah melihat atau membuat shadow puppet dengan tangan kita sendiri. Ide dasarnya adalah memasukkan sesuatu antara sumber cahaya dan dinding (seperti tangan kita) dan bayangan menjadi hidup dengan bentuk yang dapat menyerupai anjing, burung, serigala, dan lain-lain.
Sama seperti flow cytometer biasanya, kita memiliki sumber cahaya di satu sisinya dan seri detektor sekitar alat flow untuk menangkap foton-foton yang dipancarkan oleh fluorochrome atau difokuskan oleh sel-sel, seperti ditunjukkan pada gambar 1 di bawah ini.
Gambar 1: Susunan optik WOLF Cell Sorter.
Seperti flow cytometer biasanya, kita dapat membuat dua ukuran fisika properti sel, yaitu forward scatter dan side scatter, yang berdasarkan lokasi detektor terhadap titik penyelidikan laser.
Forward Scatter
Forward scatter terletak dalam garis dengan laser intercept dan biasanya dianggap sebagai ukuran relatif ukuran sel. Side scatter biasanya terletak sejajar dengan arah laser beam intercept dan digunakan untuk mengukur kompleksitas sel. Kedua parameter ini dapat digunakan untuk membantu membedakan populasi sel yang berbeda pada tingkat makro.
Melihat parameter forward scatter, kita tidak benar-benar mengukur bayangan yang dilepaskan oleh sel-sel. Sebaliknya, kita mengukur sesuatu yang disebut Mie scatter, yang dinamai setelah fisikawan Jerman yang mempelajari hal ini.
Dalam kata-kata singkat, Mie scatter menggambarkan penyebaran cahaya oleh objek yang sekitar sama dengan cahaya yang datang dan dipengaruhi oleh indeks refraktif partikel dan medium. Namun, hal ini juga dipengaruhi oleh sudut yang digunakan untuk mengukur foton-foton tersebut.
Gambar 2 menunjukkan ide forward scatter. Saat sel mempertahankan laser intercept, ia dapat menyebarkan cahaya. Hal ini diukur oleh detektor sejajar dengan arah laser. Sejak cahaya laser sangat terang, ada garis hitam depan detektor yang mencegah cahaya laser mencapai detektor. Apa yang dikumpulkan adalah foton-foton yang ditunjukkan oleh garis-garis dash. Seperti ditunjukkan pada bagian bawah gambar, ukuran sel yang lebih besar berarti scattering yang lebih kuat, sebagaimana dipelajari dalam penelitian Mie.
Side Scatter
Side scatter terletak sejajar dengan arah laser beam intercept dan digunakan untuk mengukur kompleksitas sel. Kedua parameter ini dapat digunakan untuk membantu membedakan populasi sel yang berbeda pada tingkat makro.
Dalam beberapa kata, forward scatter dan side scatter adalah komponen penting dalam analisis workflow dan dapat memungkinkan penjelasan lebih lanjut terhadap sample.